使用CRISPR進行基因表達的劑量依賴性激活

2019-11-13 10:46:18 編輯：來源：

導讀隸屬于美國多個機構的一組研究人員開發了一種使用CRISPR基因編輯技術來劑量依賴性激活基因表達的方法。在發表于《自然生物技術》雜志上的論

隸屬于美國多個機構的一組研究人員開發了一種使用CRISPR基因編輯技術來劑量依賴性激活基因表達的方法。在發表于《自然生物技術》雜志上的論文中，研究小組描述了他們以另一種方式改變基因表達的技術及其效果。

研究人員指出，先前的研究表明，使用CRISPR / Cas9基因編輯技術可以抑制或激活基因表達。但是直到現在，它還沒有被用作實現基因表達劑量依賴性激活的方法。在這項新的工作中，研究人員找到了一種方法來利用化學表觀遺傳修飾劑(CEM)來做到這一點，該修飾劑專門設計用于通過使用內源性染色質激活機制的某些部分來激活所需的基因表達。他們指出，這樣做消除了外源轉錄激活因子的必要性。

新方法涉及使用兩個組件：第一個是Cas9，它與結合蛋白FKBP沒有催化活性。第二個是用FK506制成的CEM，該CEM與將與所需細胞表觀遺傳機制相互作用的分子連接。更具體地說，他們創造了可以找到基因激活機制的CEM激活分子，包括CEM114，CEM87和CEM88。此類分子旨在與不同的所需酶結合。這兩個部分一起以所需方式用于激活基因表達。

研究人員通過用熒光綠色蛋白感染HEK293T細胞，然后對表達指導RNA和非活性Cas9的細胞進行細胞計數來測試其系統。然后，他們使用質粒表達以及三種選擇的CEM中的一種來測試基因的激活。然后，他們不得不等待兩天，以確認與未處理的細胞相比，GFP表達增加了。他們還仔細研究了用CEM處理過的非活性Cas9，以確認正是CEM系統以所需的方式激活了GFP。通過這樣做，他們發現用CEM87治療是唯一導致GFP表達增加的測試案例。

研究人員建議，他們的技術可用于驗證研究中要求劑量依賴性激活基因表達的情況。

標簽： CRISPR進行基因